氨萘非特新衍生物R16诱导肿瘤细胞周期阻滞的分子机制

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	氨萘非特新衍生物R16诱导肿瘤细胞周期阻滞的分子机制
	朱虹; 黄敏; 缪泽鸿; 丁健
	2007-06-01
关键词	肿瘤细胞依托泊甙阿霉素 ATM ATR 14-羟正定霉素氨萘非特 R16 周期阻滞衍生物
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英文摘要	目的:我们以前的研究表明一个氨萘非特新衍生物 R16,通过靶向拓扑异构酶Ⅱ,捕获可切割复合物,诱导肿瘤细胞发生 DNA 损伤,周期阻滞乃至凋亡,并显示出比母体化合物氨萘非特更优越的抗肿瘤活性,还成功克服其代谢缺点,避免了潜在的毒副作用,使 R16有望开发成为抗肿瘤的一类新药[Molecular Cancer Therapeutics 2007 Feb;6(2):484-95]。本研究将进一步探讨 R16引起肿瘤细胞周期阻滞的机制。方法:采用流式细胞术检测化合物对肿瘤细胞周期分布的影响;利用免疫荧光术和共聚焦显微镜观察化合物对周期素 B1(cyclinB1)的亚细胞定位的影响;应用 RNA 干扰技术使特定的蛋白如 ATM、ATR、Chk1和 Chk2等低表达,研究这些蛋白在化合物诱导周期阻滞过程的作用;采用 Western Blotting 检测化合物引起周期阻滞的信号途径中重要蛋白表达水平的影响。结果:R16以及母体化合物氨萘非特和传统拓扑酶Ⅱ毒剂依托泊甙和阿霉素类似,能够明显地引起剂量和时间依赖性的 G2-M 期阻滞。免疫荧光术检测到 R16处理后周期素 B1大量在细胞质里积聚,而不再入核,提示其引起的是 G2期阻滞而不是 M 期阻滞。R16和氨萘非特能够在短时间内诱导 -H2Ax 的升高,说明它们能引起肿瘤细胞发生 DNA 双链断裂,而利用 DNA 损伤感受器 ATM/ATR 的抑制剂咖啡因发现,这种损伤是诱导细胞发生 G2期阻滞的最为主要的原因,ATM 和/或 ATR 是重要的参与因子。为了进一步区别两者的作用,利用 RNA 干扰技术,特异性地使 ATM 和 ATR 低表达,分别观察 R16处理后细胞周期的变化。发现 ATM 干扰后,R16等拓扑酶Ⅱ毒剂引起的周期阻滞显著减少,而 ATR 干扰则没有这样的作用,说明 R16、氨萘非特和依托泊甙和阿霉素等其他拓扑酶Ⅱ毒剂诱导的细胞周期阻滞是 ATM 依赖而 ATR 非依赖的。对 Chk1和 Chk2进行 RNA 干扰,使它们分别低表达,发现在 R16或氨萘非特处理后的细胞中,Chk2的下调能够更多地逆转 G2期阻滞,而 Chk1干扰组和非干扰组的细胞周期分布则没有统计学差异,提示 R16和氨萘非特引起的 G2期阻滞过程中,Chk2更为关键,而对于传统拓扑酶Ⅱ毒剂来说,Chk1和 Chk2都发挥重要作用。 Western Blotting 方法检测到 R16和氨萘菲特处理24小时能够显著增加 Chk2的磷酸化水平,对 Chk1则没有影响。但是短时间(2小时)处理的细胞中则明显出现 Chk1和 Chk2的磷酸化形式, 说明 R16和氨萘非特能够导致 Chk2的持续激活和 Chk1的瞬时激活,这是它们和其他拓扑酶Ⅱ毒剂表现不同之处(在本研究实验条件下,依托泊甙和阿霉素能同时使 Chk1和 Chk2长时间激活),也能够部分解释 R16和氨萘非特引起的 G2期阻滞对 Chk1依赖较少的现象。再次利用 RNA 干扰,观察 ATM 和 ATR 下调后,Chk1和 Chk2磷酸化水平的变化,发现 ATM 干扰明显减少 Chk1和 Chk2磷酸化程度的升高,而 ATR 只对 Chk1的激活有拮抗作用;而 Chk1和 Chk2 分别下调后,R16处理的细胞中,周期素 B1的定位发生变化,不再大量积聚于细胞质中,而是有相当部分驻留在细胞核内,这个现象在 Chk2干扰后的细胞中更明显。结论:氨萘非特衍生物 R16诱导肿瘤细胞发生剂量和时间依赖性 G2期阻滞。ATM-Chk2通路介导的周期素 B1在细胞内定位的变化是 R16引起 G2期阻滞的主要原因,而 ATM-Chk1通路则并不那么重要。本研究首次报道 R16和同类化合物引起周期阻滞的机理,并且发现此类化合物激活 Chk1和 Chk2的方式与传统拓扑酶Ⅱ毒剂不同,提示可能有不同的机理参与其中。
会议录	2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集
文献子类	Article
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267505]
专题	药理学第一研究室
作者单位	中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.
推荐引用方式 GB/T 7714	朱虹,黄敏,缪泽鸿,等. 氨萘非特新衍生物R16诱导肿瘤细胞周期阻滞的分子机制[C]. 见:.