ADAM15蛋白在肿瘤转移过程中的作用及其机理研究

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	ADAM15蛋白在肿瘤转移过程中的作用及其机理研究
	陈勤; 蒙凌华; 丁健
	2007-06-01
关键词	ADAM15 细胞表面功能过表达 CHO 肿瘤转移癌转移细胞粘附蛋白
页码	1
英文摘要	目的:ADAM15是一种近年来才被发现的跨膜糖蛋白。通过国内外进行的初步的结构功能研究看来,ADAM15具有典型的药物分子靶点结构和与肿瘤转移相关的功能,可用于指导抗肿瘤药物的研制。但对于 ADAM15的功能及其信号通路的研究了解不足,成为了限制其应用的瓶颈。本研究采用稳定转染 ADAM15的黑色素瘤细胞(B16F10)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO), 观察 ADAM15在体内外肿瘤转移中的作用,并探讨其机制。方法:1．从乳腺癌细胞 MDA-MB-231中通过 RT-PCR 克隆得到 ADAM15全长基因,定向克隆进真核表达载体 pcDNA3．1和逆转录表达载体 pMSCV,分别构建成稳定表达 ADAM15的细胞株 CHO/ADAM15 和 B16F10/ADAM15。2．B16F10肺转移模型检测 ADAM15对体内肿瘤转移的影响。3．细胞粘附、划痕愈合和 tranwell 实验检测 ADAM15对细胞粘附和迁移的影响。4．用流式细胞术、siRNA、免疫共沉淀、免疫荧光和 western 等技术研究 ADAM15的作用机理。结果:体内实验证明,过表达 ADAM15能显著减少 B16F10/ADAM15肺上转移灶的数量。与体内结果相一致, CHO/ADAM15细胞更容易粘附在胞外基质纤粘蛋白(fibronectin,Fn)上,并且两种迁移检测方式都表明稳转细胞株在此基质上的迁移能力显著减弱。同时我们发现在 CHO/ADAM15的细胞表面,Fn 的受体α5β_1整合素的分布大大增加。相应地,用 siRNA 下调 CHO/ADAM15细胞中 ADAM15表达后,α5β_1在细胞表面的分布减少。免疫共沉淀和免疫荧光的结果表明这两种蛋白在细胞表面不直接相互作用,因此在 ADAM15和α5β_1之间必定有某种信号通路相连。据已有报道,Erk1/2对α5β_1的激活有调节作用。我们发现过表达 ADAM15确实能下调 Erk1/2的磷酸化水平,而 siRNA 转染下调 ADAM15表达能逆转这一现象。用 MEK 抑制剂 PD98059下调磷酸化的 Erk1/2,能使α5β_1在细胞表面的分布增加。结论:ADAM15能够通过下调 Erk1/2的磷酸化水平增加α5β_1整合素在细胞表面的分布,由此增加细胞对胞外基质的粘附,减弱迁移。本研究通过体内外转移实验,首次对 ADAM15在肿瘤转移中的作用进行了完整的阐述,并且提出了 ADAM15调节细胞粘附和迁移的一种新的机制,丰富了 ADAM15干预肿瘤细胞行为机制的认识。
会议录	2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集
文献子类	Article
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267497]
专题	药理学第一研究室
作者单位	中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.
推荐引用方式 GB/T 7714	陈勤,蒙凌华,丁健. ADAM15蛋白在肿瘤转移过程中的作用及其机理研究[C]. 见:.