题名 | 受体酪氨酸激酶EphA7在非洲爪蛙后脑与耳泡发育中的功能研究 |
作者 | 王晓磊 |
答辩日期 | 2017-06 |
文献子类 | 博士 |
授予单位 | 中国科学院大学 |
授予地点 | 北京 |
导师 | 毛炳宇 |
关键词 | 非洲爪蛙,epha7,后脑,顶部收缩,黏着斑激酶,紧密连接蛋白cldn6,耳 Xenopus, Epha7, Hindbrain, Apical Constriction, Fak, Cldn6, Otic Vesicle, Cell Extrusion |
学位名称 | 理学博士 |
其他题名 | Roles of EphA7 during the development of the hindbrain and the otic vesicle in Xenopus |
学位专业 | 细胞生物学 |
英文摘要 | 非洲爪蛙是研究神经管与耳泡发育的优良模型。神经管与耳泡的发育都经历了相似的诱导、形态发生与分化过程,也拥有类似的细胞事件,比如:聚集延伸、顶部收缩,提示二者的发育可能拥有共同的分子调控机制。本论文探讨了受体酪氨酸激酶EphA7在爪蛙神经板与耳泡发育中的功能与作用机制。 EphA7特异表达于非洲爪蛙胚胎神经板与耳泡中。用特异性的Morpholino敲低EphA7在神经板的表达,不影响神经板的诱导,但是会干扰前部神经管的闭合,导致脑部开裂。敲低EphA7会阻断后脑神经上皮细胞的顶部收缩,并抑制F-actin在细胞顶部的聚集,提示细胞表面张力减弱。进一步的实验证明,EphA7能在体内与体外调控粘着斑激酶FAK(actin聚集的关键调控因子)的磷酸化水平和活性。上述研究揭示了EphA7调控后脑神经上皮细胞的顶部收缩与后脑闭合的分子机制。 我们在非洲爪蛙发育早期鉴定了EphA7的分泌形式(EphA7-S),它与全长(EphA7-FL)都表达于神经板和耳泡中,但是各自的功能尚不清楚。在耳泡中,我们利用EphA7-ATG-MO同时阻断EphA7-S与EphA7-FL的表达,观测到耳泡减小,球囊斑变薄,毛细胞和耳石的缺陷,并伴随着运动失衡。我们设计了EphA7-sp-MO特异地抑制EphA7-FL的表达,发现耳泡有中等程度地减小,而毛细胞和耳石的分化也受到干扰,表明EphA7-FL参与了耳泡的分化。但两种MO都不影响耳泡的诱导、模式形成及耳腔的建立。在细胞水平上,EphA7-ATG-MO显著降低了紧密连接蛋白CLDN6在耳上皮细胞中的表达,而EphA7-sp-MO不影响其表达。我们的体外实验证明,EphA7的两种形式都能结合CLDN6,EphA7-FL能增强CLDN6的酪氨酸磷酸化并减弱后者在细胞膜上的定位。而EphA7-S通过拮抗EphA7-FL的这种效应,来稳定CLDN6的膜水平。进一步研究表明,CLDN6膜水平的减弱促进了耳上皮细胞外排到耳腔中,并发生凋亡。我们的结果阐明了EphA7在耳泡发育中的一个新功能及其作用机制。 为了探究EphA7-S的功能,我们通过免疫沉淀-质谱测序技术鉴定了一个与EphA7-S相互作用的蛋白Nicalin。Nicalin是一种I型跨膜蛋白,在内质网应激条件下参与了预先的质量控制过程。实验证明,Nicalin与EphA7-S共定位于内质网,Nicalin通过调控EphA7-S的易位限制其进入ER被修饰,而抑制EphA7-S的分泌。EphA7-S会增强EphA7的多聚体水平,但是Nicalin会降低这种水平。我们推断,Nicalin可能通过调节EphA7-S进入内质网的量而影响EphA7之间的多聚体水平,其生理功能还需进一步探究。 |
语种 | 中文 |
学科主题 | 生物学 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://ir.kiz.ac.cn:8080/handle/152453/12476] |
专题 | 昆明动物研究所_昆明动物研究所 昆明动物研究所_遗传资源与进化国家重点实验室 昆明动物研究所_发育生物学 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 王晓磊. 受体酪氨酸激酶EphA7在非洲爪蛙后脑与耳泡发育中的功能研究[D]. 北京. 中国科学院大学. 2017. |
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