| 题名 | Ⅱ型限制性内切酶Sau3AI的C端及其E64A突变体的晶体结构与功能研究 |
| 作者 | 徐春艳 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-05-29 |
| 授予单位 | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 授予地点 | 上海应用物理研究所 |
| 导师 | 何建华 |
| 关键词 | Sau3AI II型限制性内切酶 Sau3AI-C Sau3AI-N 晶体结构 自活化 |
| 其他题名 | Crystal structures and functional studies of the C-terminal fragment and its E64A mutant of typeⅡ restriction endonuclease Sau3AI |
| 学位专业 | 无机化学 |
| 中文摘要 | II型限制性内切酶Sau3AI识别双链DNA中的GATC序列，并在鸟嘌呤的5’端切断双链，目前它已经被广泛应用于DNA库的构建和基因组的研究中，但是对于其与DNA作用方式、识别DNA甲基化的结构基础还缺乏足够的了解。 Sau3AI的N端及C端结构域都能与DNA错配修复蛋白MutH比对， 其中N端与MutH同源性较高，并且二者都具有II型限制性内切酶所具有的典型的活性结构域D(X)6-30(E/D)XK模式，因此通常认为N端是其催化结构域；而C端只有部分与催化相关的残基，功能未知。我们的研究表明Sau3AI的C端可以结合一个拷贝的含有识别位点的双链DNA，但是不具有酶切活性。用多波长反常散射法获得了该片段1.9 Å分辨率的晶体结构，其总体结构与MutH相似，都为“V“字型，中间的凹槽应为潜在的DNA结合区域。同样利用MAD法，我们解析了全长蛋白Sau3AI/E64A突变体的晶体结构。整个结构由两个都与MutH相似的结构域组成，中间通过一个铰链区相连，这也证实了Sau3AI是一个假二聚体。按照结构中的堆积方式，C端结构域中伸出的一段回折的环区恰好覆盖在N端潜在的DNA结合凹槽上，只有两个结构域的堆积方式发生改变，才能使N端的DNA结合凹槽及活性结构域处于可用状态。基于结构分析并结合文献报道的Sau3AI的酶切性质，提出了Sau3AI的自活化模型：当DNA底物存在时，C端结构域先结合DNA底物后引起蛋白的构象变化，解除N端结构域结合DNA的空间位阻，从而使得N端的活性结构域能够发挥作用。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2012-04-11 |
| 页码 | 116 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.sinap.ac.cn/handle/331007/7264]  |
| 专题 | 上海应用物理研究所_中科院上海应用物理研究所2004-2010年 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 徐春艳. Ⅱ型限制性内切酶Sau3AI的C端及其E64A突变体的晶体结构与功能研究[D]. 上海应用物理研究所. 中国科学院上海应用物理研究所. 2008. |
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