~(32)P后标记方法测DNA加合物

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	~(32)P后标记方法测DNA加合物
	刘淑芬 ; Rappaport S M ; Bodell W J
刊名	环境化学
	1990-10-28
期号	5 页码:18-26
关键词	DNA加合物环氧苯乙烯后标记指纹图反应产物碱基比空白对照取代物自显影分离指
中文摘要	用~(32)P后标记的方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应的加合物,是将小牛胸腺DNA和环氧苯乙烯仿照体内条件进行体外反应,反应产物在核酸内切酶及外切酶的存在下,水解成2’-脱氧核糖核苷3’-单磷酸(dNmP).这种水解后的3’-单磷酸在T_4多核激酶的存在下,使γ~(32)P ATP上的放射磷与核苷的磷进行交换反应,生成2’-脱氧核苷-3’,5’-二磷酸(dNDP).被标记的3’,5’-二磷酸及加合物,通过ODS薄层色谱板及PEI纤维阴离子交换色谱板进行适当的分离分辨分析,使DNA加合物从正常的核酸分子中分离出来.用自显影加上空白对照确定加合物的指纹图,最后用液体闪烁计数要定量分析DNA加合物的量。用这种方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应加合物,在自显影指纹图上发现5种多余的斑点,初步确定是DNA的5种加合物或加合物的衍生物.它们的修饰点是鸟嘌呤上的N-7,N-2,O~6位,修饰量在本实验的条件下是1加合物/10~4—6正常核酸.同时用这种方法测动物活细胞和环氧苯乙烯修饰反应产物,发现有DNA加合物存在.在职业接触苯乙烯工人静脉血中也发现有DNA-环氧苯乙烯的加合物,测定结果其样品指纹图与体外反应DNA指纹图类似. ~(32)P后标记方法是灵敏的,最高可侧到1加合物/10~(10)—11正常核酸,这已接近二倍体细胞的基因水平,是当今测DNA加合物方法中最
学科主题	环境化学
公开日期	2012-03-20
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.rcees.ac.cn/handle/311016/3636]
专题	生态环境研究中心_环境化学与生态毒理学国家重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	刘淑芬,Rappaport S M,Bodell W J. ~(32)P后标记方法测DNA加合物[J]. 环境化学,1990(5):18-26.
APA	刘淑芬,Rappaport S M,&Bodell W J.(1990).~(32)P后标记方法测DNA加合物.环境化学(5),18-26.
MLA	刘淑芬,et al."~(32)P后标记方法测DNA加合物".环境化学 .5(1990):18-26.