摘  要

海洋来源内生真菌次级代谢产物的研究如今受到广泛关注。由于与陆地环境的不同，海洋中的真菌面临的生存环境要复杂很多。红树林植物、海藻、海绵以及海底沉积物是海洋真菌的主要来源，处于这种环境下的真菌一方面要适应环境不同而带来的压力，另一方面又要应对同一环境中各种生存者带来的挑战。次级代谢产物作为真菌用于交流的工具，对其进行系统研究，对于发现结构新颖、活性显著的天然产物具有十分重要的意义。

本论文通过对海藻及红树林植物来源内生真菌的分离和筛选，利用TLC和HPLC综合分析了菌株代谢产物的多样性，并对部分菌株的粗提物进行了抗菌活性测试，最后选择了白黄笋顶孢霉TK-43（Acrostalagmus luteoalbus TK-43）和咖啡青霉MA-314（Penicillium coffeae MA-314）两株真菌进行次级代谢产物的研究。通过多种分离方法，从中得到60个单体化合物，其中15个新化合物，结构类型主要包括吲哚二酮哌嗪类与异香豆素类化合物等。

从分离自刺松藻的白黄笋顶孢霉TK-43（A. luteoalbus TK-43）中分离得到42个化合物（AL1a–AL39），包括一系列新的具有氮甲氧基取代的吲哚二酮哌嗪类化合物（AL1a–AL7），1个新的硫代吲哚二酮哌嗪类化合物（AL9）以及1个新的氧杂蒽酮类化合物（AL19），并且通过单晶培养，得到了化合物AL1–AL6以及AL19的晶体结构。目前关于氮甲氧基取代的吲哚二酮哌嗪化合物的报道较少，只有两个同类型化合物在之前被发现。此外，化合物AL1–AL3为三对吲哚二酮哌嗪对映异构体，对其进行手性拆分得到了三对平面结构相同但绝对构型完全相反的单体化合物（AL1a/AL1b，AL2a/AL2b，AL3a/AL3b），并通过ECD计算方法完成了对单体化合物的绝对构型的确定。该类吲哚二酮哌嗪的异构现象只在AL1–AL3中被发现，且手性拆分得到的单体结构稳定，不存在绝对构型相互转化的现象，因此其异构化的产生应处于生物合成阶段，而与后期的分离纯化过程无关。从红树林植物拉关木来源的咖啡青霉MA-314（P. coffeae MA-314）的代谢粗提物中分离鉴定结构18个（PC1–PC18），其中包括一个新的六元内酯类化合物（PC1）以及两对异香豆素类对映异构体（PC2和PC3）。

对所分离得到的部分化合物根据其结构类型选择了不同的生物活性测试实验，包括抗菌活性实验，抗乙酰胆碱酯酶活性实验以及抗氧化活性实验。在抗菌活性实验中，化合物AL2b对辣椒根腐病菌（Fusarium solani）有微弱的抑制活性，MIC值为32 μg/mL，但其对映异构体AL2a因为构型的差异并未表现出明显活性。同样，相比较于其差向异构体AL3a与AL3b未表现出明显活性，化合物AL4对番茄早疫病菌（Alternaria solani）表现出较弱的抑制活性，MIC值为32 μg/mL。化合物PC1对两株植物致病真菌苦瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. momordicae nov. f.）与苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）表现出良好的抑制活性，MIC值均为1 μg/mL，略微高于阳性对照两性霉素B（MIC=0.5 μg/mL）。抗乙酰胆碱酯酶活性实验中，化合物AL1a表现出优于其对映异构体AL1b以及差向异构体AL2a与AL2b的活性，IC₅₀值为2.3 μM。通过分析构效关系发现，当该类化合物C-3与C-6的绝对构型不同时，其表现出的活性要优于相同时，并且在C-3位置为R构型时，活性要优于S构型。抗氧化活性实验中，新化合物PC2与PC3并未表现出明显的抗氧化活性，但是已知化合物PC4表现出一定的活性，IC₅₀值为656 μM，这一现象说明该类化合物C-4位置的羟基取代会有效减弱其抗氧化活性。

本论文对上述两株海洋来源内生真菌的次级代谢产物进行了系统的研究，从结构鉴定以及活性测试方面对其进行了综合评价，所分离得到的一系列结构新颖且具有一定生物活性的化合物为后续的海洋真菌天然产物研究以及新型海洋药物的开发提供了研究基础。