口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染性疾病。曾多次在世界范围内爆发，造成严重的经济损失。接种灭活口蹄疫病毒疫苗是预防口蹄疫最有效的手段。随着对疫苗安全性和质量要求的不断提高，对其进行有效的分离纯化日益受到重视。色谱分离具有分辨率高、易于规模放大的优势，在动物疫苗分离纯化中具有潜在的应用前景。但是如何实现结构复杂、尺寸达到28 nm的病毒抗原颗粒在有效分离纯化的同时，保持颗粒结构的稳定，获得高的抗原收率，仍然是一个挑战。本文旨在通过研究灭活FMDV在离子交换色谱分离过程中，影响其分离效率和颗粒稳定性的关键因素，以建立高效的纯化工艺。主要研究内容包括如下几方面： （1）选取DEAE-FF、DEAE-650M、以及DEAE-POROS三种具有相似配基密度和粒径，但孔径显著不同的阴离子交换介质，考察了介质孔径对灭活FMDV动态结合载量（Dynamic binding capacity，DBC）的影响。发现灭活FMDV在DEAE-POROS（孔径214 nm）和DEAE-650M（孔径106 nm）介质上的DBC分别达到11.53和10.03 mg/mL，而在小孔径的琼脂糖介质DEAE-FF（孔径32nm）介质上的DBC仅有1/10。激光共聚焦实验表明灭活FMDV在DEAE-FF介质上的吸附仅限于微球的表面薄层区域，而在大孔DEAE-POROS介质上的吸附能扩散进入微球内部。 （2）研究了离子交换介质孔径对灭活FMDV纯化收率和稳定性的影响。经过DEAE-FF、DEAE-650M、以及DEAE-POROS离子交换层析后，FMDV的收率分别为54.46%、66.32%和68.42%,。通过高效液相凝胶过滤色谱法（HPSEC）分析发现，灭活FMDV与介质吸附-解吸作用会导致其裂解成无免疫活性的12S，且裂解程度随着介质孔径的增大而减小。利用差示扫描量热仪（Differential Scanning Calorimetry，DSC）分析灭活FDMV吸附在介质上发生解聚的机理。灭活FMDV在溶液中发生裂解生成12S的转变温度Tm1为48.52oC。而吸附在三种介质上之后的Tm1值分别降低为41.73oC, 44.04oC和45.37oC，表明在层析介质上的吸附导致灭活FMDV更易于发生裂解，而吸附在大孔径的DEAE-POROS介质上的灭活FMDV，稳定性相对较高。 （3）建立了大孔DEAE-POROS介质纯化灭活FMDV的工艺。对缓冲液的电导率、进样蛋白浓度、停留时间等参数进行了优化。优化条件下，灭活FMDV的IEC收率达94%。经过进一步超滤浓缩和凝胶过滤色谱（SEC）精制，最终灭活FMDV收率为79%，纯化倍数为173，宿主DNA的去除率达95%以上。 本文研究结果表明大孔介质纯化灭活FMDV相比传统的琼脂糖介质在动态结合载量、活性收率和结构稳定性上具有明显的优势，并探讨了可能的作用机理，对FMDV的色谱纯化具有一定的指导意义。