| 题名 | 基于纳米SiO2的酶联免疫分析及应用 |
| 作者 | 王乾龙 |
| 答辩日期 | 2017-05 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 导师 | 丁立生 ; 青琳森 |
| 关键词 | 纳米二氧化硅 酶联免疫分析 牛血清白蛋白 2 布洛芬 4-二氯苯氧乙酸 |
| 学位专业 | 药物化学 |
| 英文摘要 | 酶联免疫分析（ELISA）由于具有特异性强、灵敏度高、方法简捷、分析容量大、检测成本低等优点，且一般不需要昂贵仪器，可以简化或省去前处理步骤等，其应用范围涉及到生物分析化学各个领域，可广泛应用于抗原、抗体、药物、激素、毒素等物质的定性定量检测。但传统的ELISA多利用96孔酶标板作为包被载体，从而产生一些不可避免的缺点：检测范围窄，易受扩散系数的影响，检测结果变异系数较大等。为改善分析效果，我们建立了一种基纳米二氧化硅（nano-SiO2）的ELISA分析方法，其特点是将nano-SiO2作为包被载体从而避免了上述缺点，并将所建立的方法应用于2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、牛血清白蛋白（BSA）和布洛芬的检测。本学位论文主要内容如下：第一章报道了基于纳米SiO2对豆芽中残留2,4-D检测的直接竞争ELISA法。2,4-D是一种常用的除草剂和生长调节剂，其在食物中的残留会对人体造成严重的危害，为了考察豆芽中2,4-D的残留情况。我们首先通过碳二亚胺交联法将2,4-D与载体蛋白偶联，获得2,4-D的免疫原（BSA-2,4-D）和包被原（OVA-2,4-D），通过免疫成年健康雄兔获得可以特异性识别2,4-D的多克隆抗体。利用经修饰的St?ber法制备出SiO2纳米粒子，在其表面修饰氨基，最终完成与OVA-2,4-D的偶联。随后，通过高碘酸钠氧化法获得HRP标记的2,4-D多克隆抗体，并分别建立基于酶标板和纳米材料的直接竞争ELISA法，完成对该方法的优化和其特异性、精密度、准确度的验证，并对二者的检测结果进行比较。第二章报道了基于纳米SiO2对疫苗中残留BSA检测的直接竞争ELISA法，实现了对生物大分子的检测。牛血清是利用细胞培养基制备疫苗过程中的重要成分，而BSA牛血清中主要蛋白，其在疫苗中过量残留可能会引起严重的过敏反应，威胁人们的健康，因此有必要对疫苗中残留的BSA进行检测。本部分是用该方法检测疫苗中BSA的残留情况。首先利用经修饰的St?ber法制备出SiO2纳米粒子，在其表面修饰氨基，最终完成与BSA的偶联。通过高碘酸钠氧化法获得HRP标记的BSA多克隆抗体。随后，将其和样品中的BSA竞争地与HRP标记的BSA抗体结合，在经过离心、洗涤、底物显色后实现对样品中BSA的定量分析。在对方法的特异性、精密度、准确度验证后，证明该方法可以准确的实现对疫苗中残留BSA的检测。第三章是基于纳米SiO2对尿液中布洛芬检测的酶联配体分析法的建立。上两章报道的两种方法是基于抗原抗体的特异性结合反应而建立。但抗体通常难以得到、且价格昂贵，故利用人血清白蛋白（HSA）与小分子药物的高亲和性代替抗原、抗体的特异性反应建立了酶联配体分析法。布洛芬是一种重要的非甾体抗炎药，用于治疗风湿病和肌肉骨骼疾病引起的急性和慢性疼痛，对其在生物样品的含量进行检测具有重要的意义。本部分是利用酶联配体分析法实现对尿液中布洛芬的含量检测。首先，利用经修饰的St?ber法制备出SiO2纳米粒子，在其表面修饰氨基，最终完成与HSA的偶联。利用活化酯法完成布洛芬和HRP的偶联。随后，将样品中的布洛芬和HRP标记的布洛芬竞争地与SiO2-HSA结合，经离心、洗涤、底物显色后实现对样品中布洛芬含量的定量分析。该方法的线性范围和检测限良好，经验证该方法的精密度和准确度高。最后，利用该方法完成了对服药后36 h内尿液中布洛芬含量的监测。第四章为综述，概述了酶联免疫吸附分析方法及其应用。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 天然产物研究 |
| 产权排序 | 1 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://210.75.237.14/handle/351003/28854]  |
| 专题 | 成都生物研究所_天然产物研究 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王乾龙. 基于纳米SiO2的酶联免疫分析及应用[D]. 中国科学院大学. 2017. |
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