普通小麦5DL染色体分选及染色体BIBAC文库构建技术体系优化

	普通小麦5DL染色体分选及染色体BIBAC文库构建技术体系优化
	佘茂云 1; 郭东伟 2; 李连城 1; 徐兆师 1; 陈明 1; 曲延英 3; 马有志 1
刊名	中国农业科学
	2008
卷号	41 期号:2 页码:354-361
关键词	普通小麦端体细胞周期同步化流式细胞术染色体分选
ISSN号	0578-1752
其他题名	Optimizing Protocol of Flow Sorting Chromosome 5DL （Triticum aestivum L.） and Chromosome-specific BIBAC Library Construction
英文摘要	【目的】优化小麦染色体流式分选及特定染色体BAC文库构建技术体系,为加速小麦基因组学研究提供技术支撑。【方法】采用双阻断法对中国春5DL端体根尖分生组织进行细胞周期同步化处理,结合机械匀浆法制备染色体悬浮液进行流式核型分析,分选染色体5DL及PCR检测,对小麦染色体分选技术体系进行优化。对复合峰分选产物BamHI酶切制备高分子量（high molecular weight,HMW）DNA,按10﹕1质量比与双元细菌人工染色体（binary-bacterial artificial chromosome,BIBAC）连接,电激转化感受态细胞DH10B,随机挑取100个重组子,经NotI完全酶切后脉冲电泳检测插入片段大小,优化小麦染色体BAC文库构建的技术体系。【结果】经1.25mmol·L~(-1)羟基脲（hydroxyurea,HU）18h,恢复6h和1μmol·L~(-1)氟乐灵（trifluralin）2.5h的顺序处理的小麦根尖分生组织,细胞有丝分裂指数可超过60%。流式核型分析表明,5DL端体的流式核型图由清晰的三个复合峰和两个单峰组成。PCR鉴定表明,其中一单峰确由5DL染色体组成。部分酶切复合峰染色体3～10min,可以获得50～300kb的HMWDNA。连接产物检测显示平均插入片段可达100kb左右,根据荧光通道值,估算5DL端体的大小约为482Mb,构建库容为19000个克隆的5DL端体特异文库即可达到约4倍的覆盖率。【结论】上述两项优化技术适用于小麦染色体的分选及染色体特异文库的构建。
学科主题	分子生物学 ; 农作物
语种	中文
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.nais.net.cn/handle/2HMLN22E/128841]
专题	作物科学研究所_分子生物学系
作者单位	1.中国农业科学院作物科学研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程, 农业部作物遗传育种重点开放实验室, 北京, 100081; 2.西北农林科技大学农学院, 陕西, 杨凌, 712100; 3.新疆农业大学农学院, 新疆, 乌鲁木齐, 830052
推荐引用方式 GB/T 7714	佘茂云,郭东伟,李连城,等. 普通小麦5DL染色体分选及染色体BIBAC文库构建技术体系优化[J]. 中国农业科学,2008,41(2):354-361.
APA	佘茂云.,郭东伟.,李连城.,徐兆师.,陈明.,...&马有志.(2008).普通小麦5DL染色体分选及染色体BIBAC文库构建技术体系优化.中国农业科学,41(2),354-361.
MLA	佘茂云,et al."普通小麦5DL染色体分选及染色体BIBAC文库构建技术体系优化".中国农业科学 41.2(2008):354-361.