小麦TILLING分析中CEL I酶切及PCR反应体系的优化

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	小麦TILLING分析中CEL I酶切及PCR反应体系的优化
	潘娜 1; 郭会君 1; 赵世荣 1; 赵林姝 1; 古佳玉 1; 李军辉 1; 王广金 2; 徐荣旗 3; 刘录祥 1
刊名	植物遗传资源学报
	2012
卷号	13 期号:5 页码:830-837
关键词	小麦 TILLING CEL I 优化糯质基因Waxy
ISSN号	1672-1810
其他题名	Establishment and Optimization of CEL I-based TILLING for Wheat
英文摘要	在小麦中建立稳定的基于CEL I酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP_2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg~(2+)及引物浓度、改变目标片段CEL I酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系。在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳;在设定的浓度范围内dNTP和Mg~(2+)浓摩对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带。引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L。20μl酶切体系中,最佳CEL I酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CEL I缓冲液。最终在小麦中建立起了基于CEL I酶切的高通量TILLING筛选技术体系。
学科主题	农作物
语种	中文
内容类型	期刊论文
源URL	[http://111.203.20.206/handle/2HMLN22E/106106]
专题	作物科学研究所_职能部门
作者单位	1.中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物航天诱变技术改良中心, 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程, 北京, 100081 2.黑龙江省农业科学院生物技术研究所, 哈尔滨, 150086 3.中国农业科学院生物技术研究所, 北京, 100081
推荐引用方式 GB/T 7714	潘娜,郭会君,赵世荣,等. 小麦TILLING分析中CEL I酶切及PCR反应体系的优化[J]. 植物遗传资源学报,2012,13(5):830-837.
APA	潘娜.,郭会君.,赵世荣.,赵林姝.,古佳玉.,...&刘录祥.(2012).小麦TILLING分析中CEL I酶切及PCR反应体系的优化.植物遗传资源学报,13(5),830-837.
MLA	潘娜,et al."小麦TILLING分析中CEL I酶切及PCR反应体系的优化".植物遗传资源学报 13.5(2012):830-837.